主题：用弧菌藻毒净控制弧菌实践中的TCBS检测误区

  常常有用户说，用了我们弧菌藻毒净等产品3天后，说明书上说是抑制弧菌和链球菌的，使用3天后，水体中会基本检测不到弧菌，但为什么用过后，用TCBS培养基来检测却发现黄弧菌落增加了很多，最终结果证明，那个黄色菌落是乳酸菌造成（是乳酸菌菌落），而不是真正的黄弧菌，具体解释如下，先以一个养殖户的提问来开始这个话题；

1、老师你好，有一篇报道疑惑供您参考解释。

   1，枯草芽孢杆菌  乳酸菌使用前后水质弧菌检测对比
   （1）使用前绿弧菌160个|ml  黄弧菌3180个|ml
   （2）8个小时后检测绿弧菌180个|ml  黄弧菌2840个|ml
    (3)24小时后检测绿弧菌130个|ml  黄弧菌2950个|ml
  结束语是使用前后变化相差不大，所以有益菌的生长繁殖不能抑制弧菌的生长繁殖。
  对蛭弧菌产品使用前后水质弧菌检测对比也是不理想的。
   老师这个结果真实吗，是配伍不对呢，还是乳酸菌含量不足呢，希望解释说明谢谢

    1.使用的益生菌是否有效的不确定性，这需要第三方权威机构出示检测报告，特别是乳酸菌的含量是否足量；因为乳酸菌才是抑制弧菌的主力军。而据我调查，市场上很难找到高活力高含量的乳酸菌，大部分产品基本不存在乳酸菌，却也冒充乳酸菌。
    2.即使是乳酸菌（乳酸菌在自然界中有几百种 ，乳酸菌这个名字只是一个统称），也必须是粪肠球菌为主的产品，对弧菌和链球菌才有效，而象植物乳杆菌，嗜酸乳杆菌，则效果甚微；
    3.您的提问中没有提到使用量，因为乳酸菌抑杀弧菌和链球菌，是必须达到一定的量的，这个量就是每立方米水体中投入乳酸菌至少50亿个乳酵菌才行，而您的问题中却没有提到这一点，例如象一亩池塘，必须投入至少5万亿个乳酸菌，相当于300亿/克的粪肠球菌必须投入166克左右，而按市场常规的价格（540元/公斤），则也要投入90元左右，且必须至少20天投放一次，考虑到市场上的乳酸菌大多达不到含量，只有一半以下的检测值（我多年来观察的结果），所以，如果要达到效果，必须投入180元/次/亩，这不是一般养殖户能承受得起的。
    使用我们的弧菌藻毒净，每25天使用一次，基本上可以保证乳酸菌在水体中的绝对优势并保持25-40天优势，保证没有弧菌发生；紧急情况下使用弧菌藻毒净一次；
    但在这里我还需要说明一点，就是如果用现行的TCBS培养基来检测黄或绿弧菌的话，则使用了我们的弧菌藻毒净后，再用TCBS培养基去检测水中的黄弧菌的话，则是增加的，而且增加得非常迅猛，这里完全是一个误会，因为直接用我们的产品去这个TCBS培养基上划线检测的话，全部都会被认定为黄弧菌，但公司不可能专门去生产黄弧菌呵，这就是乳酸菌而已，因为TCBS培养基的原理是：使用胆酸盐和牛胆汁粉来抑制革兰氏阳性菌（乳酸菌是革兰氏阳性菌），以溴麝香草酚兰和麝香草酚兰为pH指示剂，变色范围pH6.0(黄)～7.6(蓝绿)，以蔗糖为碳源，通过发酵培养反应造成PH的变化（降低），从而促使溴麝香草酚兰显出不同的颜色（黄色）；
     现在问题来了，强微公司产品中的乳酸菌活力强，是耐胆盐耐胆酸的，且可发酵蔗糖，产酸能力很强，能把TCBS培养的PH降低到5以下，所以，培养后呈黄色，让人们误以为是致病性弧菌（如溶藻弧菌，或霍乱弧菌），建议您此时取黄色菌落于高倍显微镜下进行观察，呈圆形的为我们的乳酸粪肠球菌、屎肠球菌和乳酸片球菌，呈弧形或逗点状的才是致病性弧菌；或进行革兰氏染色试验，因为弧菌是革兰氏染色阴性菌，而乳酸菌是革兰氏染色阳性菌，这样也可以区别开来。
     然后又有人要问了，特别是我们遇到一家对虾育苗场的技术总监不断追问，他说他们用了国内两家公司的乳酸菌产品，而且是比较知名的公司的乳酸菌产品，在TCBS培养基上都没有这个现象，为什么就你们公司的乳酸菌有这个变黄菌落的现象呢，这让我真的无言以对，只好向他索取那两家公司的样品，拿回来检测一看，这两家公司的乳酸菌含量都严重不足，且远远低于这两家公司标注的分析保证值，继续试验后证明，这两家公司的乳酸菌也不耐胆酸盐（这样在TCBS培养基上就根本长不出来），所以，很显然，这就解释了为什么这两家公司的乳酸菌在TCBS培养基长不出来（自然也就没有黄色菌落了），而为什么我公司的乳酸菌可以在TCBS培养基上长出黄菌落来（因为我们的乳酸菌是耐胆酸盐的，活力很强），我向这个技术总监解释了此事，他也承认我们的产品解决了困扰他的氨氮和亚盐超标问题，对虾苗也一直非常良好，各项指标都不错；但最终仍然因为害怕或别的原因或沟通不畅等原因，而不接受我们的产品。
     以上是我们公司在推广产品中遇到的最头痛的问题，造成了极大的误解误会；例如在TCBS培养基上检测，因为用了我们的乳酸菌产品，黄色菌落增加是肯定的结果；
    国家检测副溶血弧菌（绿弧菌）的标准GB4789.7-2013中明确规定：必须在培养18～24小时以内观察有无绿色菌落，否则会受杂菌影响而判断无效，所以这一点也需要注意，一定要在24小时以内观察的才有效，超过24小时的，不管是变黄还是变绿，都是无效判断，因为超过24小时后，随着杂菌的进入，会造成培养基中代谢产物的成分变化巨大，并从而产生各种颜色，包括变成绿色都有可能，从而造成可能误会为绿弧菌，所以，国家标准规定，必须在24小时以内观察的才有效。

    另外，我们在广东湛江有一个对虾养殖大户，用了我们的弧菌藻毒净之后，他说弧菌检测不到了，产品效果非常好，我们马上就此事联系到他，想了解是否还有其他的检测弧菌的方法，以避开TCBS培养基的误会，哪知道，他也是用TCBS培养基来检测弧菌的，只是他说，他不在乎黄弧菌，他在乎的是绿弧菌，他说，黄弧菌不可怕，怕的是绿弧菌，如果一旦有绿弧菌出现，则对虾肯定会出问题，用了强微公司的弧菌藻毒净之后，基本上检测不到绿弧菌了，他的对虾也生长良好，从未出过事；
    以下是他发来的检测图：（使用产品后黄色菌增加，但主要是耐胆酸盐的乳酸菌形成的黄色菌落，在黑暗下不会发光）

使用产品之前则有绿弧菌，如下图

    我公司技术部做的TCBS培养乳酸菌试验，从图可以看到，变黄的区域PH很低，而没有变黄的区域PH较高，但由于存放时间有5天了，所以，也有杂菌菌落存在，并不是绿弧菌

直接用我们的乳酸菌划线的TCBS培养结果

您也可以在显微镜下观察，在1000倍以上的显微镜下观察乳酸粪肠球菌和屎肠球菌，是球形的，如下图

而弧菌是弧形的，或逗点状的；如下图